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体育知识 2022-11-25 06:55www.1689878.com最新体育新闻

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本文看点:

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先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

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按比例(例如1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

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接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)

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在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2),向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数),将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

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用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

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1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。

3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

注意事项

如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基。

药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

小结
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